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    人膽管癌細胞(QBC-939)培養說明書
    更新時間:2019-01-08 點擊量:2142

                                膽管癌細胞(QBC-939)

    貨號:HDCL-058

     

    細胞介紹

    該細胞由第三軍醫大學西南醫院建系于1997年,細胞來源于一位接受了肝膽手術的肝外膽管癌患者

     

    細胞特性

    1) 來源:肝外膽管腫瘤

    2) 形態上皮細胞貼壁生長

    3) 含量:>1x106 個/mL

    4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

    5) 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

     

    運輸和保存:使用T25瓶充液發送活細胞。收到細胞后,請先在顯微鏡下檢查細胞生長狀態,并將T25瓶置于培養箱約6h或過夜后,再次檢查細胞狀態。若狀態良好,可按照以下細胞培養步驟進行細胞后續處理操作。若發現可疑污染物,請及時與我們取得聯系。

     

    細胞用途:僅供科研使用。

                           

    細胞培養步驟

    一.培養基培養凍存條件準備:

    1) 準備RPMI-1640養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;胎牛血清,10%。或準備DMEM培養基(GIBCO,貨號11995-065),90%;胎牛血清,10%;雙抗,1%。

    2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。

    3) 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用液氮儲存。

    二. 細胞處理

    1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

    2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養

    對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

    1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

    2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化

    3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

    4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

    3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存

     

    注意事項:

    1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

    2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

     

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